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動物醫(yī)學(xué)實驗
大鼠顱腦損傷/MCAO模型

時間:2020-07-17 16:56:00 瀏覽:6362次



人類疾病的動物模型在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究方面占有十分重要的地位。威斯騰生物動物中心經(jīng)過十余年的發(fā)展,累積了豐富的動物培養(yǎng)和模型構(gòu)建經(jīng)驗,在動物模型構(gòu)建方法上摸索出獨有經(jīng)驗,常規(guī)動物模型構(gòu)建平均成功率98%以上,重難點模型(開胸/開顱術(shù)等)構(gòu)建平均成功率75%以上,形成了高效高質(zhì)量的動物模型構(gòu)建方法庫,可成功構(gòu)建上百種疾病動物模型。


大鼠MCAO模型構(gòu)建

動物適應(yīng)性喂養(yǎng)

動物自購回后保持動物房12h-12h晝夜交替,保持動物自由飲水、進食,溫度23-25℃,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進入實驗。

大鼠MCAO模型構(gòu)建

參照改良Zea Longa線栓法構(gòu)建大鼠MCAO模型。大鼠術(shù)前12h禁食不禁水。

大鼠稱重,7%水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉,頸前部備皮、消毒,行頸正中切口,鈍性分離右側(cè)皮下組織及肌肉暴露出頸總動脈,眼科鑷小心分離伴行于頸總動脈的迷走神經(jīng)及動脈周圍粘膜組織,分離出頸總動脈大約1~1.5cm。繼續(xù)向頭部分離,小心剔除覆蓋于動脈上方的粘膜組織,可見頸外動脈、頸內(nèi)動脈與頸總動脈呈“Y字形”分布,游離出獨立的頸內(nèi)、外動脈。結(jié)扎頸外動脈及頸總動脈近心端,頸內(nèi)動脈埋線并用動脈夾暫時夾閉。在頸總動脈近心端結(jié)扎處剪一“V”形切口,用眼科鑷夾持栓線由頸總動脈進入頸內(nèi)動脈,到達動脈夾時,將埋線稍微拉緊(防止?jié)B血),松開動脈夾,繼續(xù)插入栓線,當(dāng)特制栓線黑色標(biāo)記處到達Y字形分叉口附近時,此時栓線已進入大腦中動脈且不能繼續(xù)前行。

栓線插入完畢后,將預(yù)留的結(jié)扎線拉緊固定。醫(yī)用棉簽清理頸部血塊,縫合皮膚,酒精棉球消毒,將大鼠放回籠子。90min過后,麻醉大鼠,頸部消毒,打開一個小口,用眼科鑷夾住栓線固定處將栓線拔出約1cm實現(xiàn)血流再灌注,剪去多余栓線,逐層縫合。

注意事項:


1)分離頸部肌肉時,兩側(cè)小塊肌肉叫鼓泡腺體(很多人誤認(rèn)為是甲狀腺),避免損傷導(dǎo)致出血。
2)見到頸動脈鞘了則要注意細致分離迷走神經(jīng),若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。
3)分離血管時,要盡量將血管剝離的干凈些,這樣在用眼科剪剪口時就不會誤剪外膜,且要剪一個斜行的切口。
4)系牢拴線繞在 CCA 遠心端的細線時注意掌握力度,不可不扎,否則出血較多,但不可過緊,否則插線困難
5)線栓是分幾次一點點插進去的,而不是夾住線栓的中間部分一下子插進去的,直到遇到輕微阻力停止插線。


SD大鼠顱腦損傷模型(Feeney 自由落體法

實驗鼠稱重,7%水合氯醛麻醉(5ml/kg),頭部備皮,俯臥固定于顱腦損傷儀上。手術(shù)區(qū)酒精棉球消毒,將大鼠頭頂部皮膚矢狀切開,剝離筋膜。以人字縫前3mm、冠狀縫右側(cè)3mm為圓心用顱骨鉆鉆孔并擴大骨窗(直徑5mm),鉆孔過程需注意不能損壞硬腦膜,將致傷撞墊輕輕置于骨窗中央的硬腦膜上,用40g的砝碼自20cm高處沿滑桿自由落體落下打擊撞墊(沖擊力為800g·cm),造成大鼠右頂葉局限性腦挫裂傷。骨蠟封窗,縫合頭皮。


威斯騰實驗服務(wù)流程


威斯騰生物服務(wù)項目

分子生物學(xué)檢測 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) 動物實驗
實時熒光定量PCR 單克隆抗體制備 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP 多克隆抗體制備 抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)技術(shù) Western-blot 實驗服務(wù) 脊髓損傷模型
生化指標(biāo)檢測 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) 腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測 原核蛋白表達純化 骨神經(jīng)損傷模型
染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP 真核蛋白表達純化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) 心力衰竭模型
SLAC蛋白組學(xué) 肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝 實驗課題整體外包 粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化 整體課題外包 大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化 細胞整體實驗外包 慢性之氣管炎模型
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 動物整體實驗外包 過敏性哮喘模型
腺相關(guān)病毒包裝純化 肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片 原代細胞培養(yǎng) 肝纖維化模型
細胞因子芯片 骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng) 膽結(jié)石模型
BioPlex懸浮芯片 脂肪干細胞培養(yǎng) 急性胰腺炎模型
生長因子芯片 心肌成纖維細胞培養(yǎng) 急性腎衰竭模型
炎癥因子芯片 軟骨細胞培養(yǎng) 體內(nèi)血栓模型
血管生成因子芯片 血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) 關(guān)節(jié)炎模型
凋亡因子芯片 神經(jīng)元細胞培養(yǎng) I型和II型糖尿病模型
趨化因子芯片 內(nèi)皮組細胞原代培養(yǎng) 裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 基因編輯動物
電生理相關(guān)服務(wù) 動物整體實驗服務(wù)
膜片鉗實驗
細胞生物學(xué)檢測 高通量測序 代謝組學(xué)
細胞原代培養(yǎng) mRNA測序 氣相色譜GC/MS
MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測 全基因組測序 核磁共震NMR
細胞周期檢測 RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學(xué)相關(guān)實驗
Transwell細胞遷移/侵襲 16s擴增子測序 Micro-CT
流式分選 Small RNA測序 小動物活體成像
CCK8/XTT檢測 宏基因組測序 核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性 單細胞測序 PET-CT
藥物篩選細胞學(xué)實驗 circleRNA測序
細胞粘附性檢測 甲基化測序 基因編輯動物
細胞劃痕實驗 條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學(xué)整體實驗 全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理檢測 CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 基因芯片
掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色 CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交 基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)
行為學(xué)檢測 藥物篩選服務(wù)項目 藥效學(xué)評價
曠場實驗 高通量自動藥物篩選平臺 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價
重復(fù)性刻板行為檢測 細胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
動物跑臺檢測 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
強迫游泳 分子藥理研究平臺 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
生物膜片鉗藥物篩選平臺 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價
常規(guī)藥物體外篩選


【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)! 
【全國免費熱線】400-675-6758
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