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技術(shù)原理：

CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）最新出現(xiàn)的一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術(shù)。CRISPR是細菌和古細菌為應(yīng)對病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。在這一系統(tǒng)中，crRNA（CRISPR-derived RNA）通過堿基配對與tracrRNA（trans-activating RNA）結(jié)合形成雙鏈RNA，此tracrRNA/crRNA二元復(fù)合體指導(dǎo)Cas9蛋白在crRNA引導(dǎo)序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠛痛笫蠡蚪M特定基因位點進行精確編輯， 目前已經(jīng)成功應(yīng)用于大、小鼠基因KO/KI的模型制備。

技術(shù)特點：

（1）無物種限制

（2）靶向精確性更高

（3）可實現(xiàn)對靶基因多個位點同時敲除

（4）基因調(diào)控方式多種多樣

（5）修飾效率高，實驗周期短

條件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系統(tǒng)實現(xiàn)。首先把兩個LoxP位點插入到目的基因的一個或幾個重要外顯子的兩端，以制備出有兩個Loxp位點的floxed小鼠。floxed小鼠在與表達Cre重組酶小鼠雜交之前，該基因正常表達；當(dāng)floxed小鼠與組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后，可實現(xiàn)在特定的組織或細胞中敲除該基因，而在其它組織或細胞中該基因表達正常。

建系原則與流程：

1、與野生型小鼠雜交：陽性CRISPR-Pro小鼠（+/flox）與野生型小鼠（+/+）雜交，獲得F1代雜合子小鼠（+/flox）；

2、挑選一對F1代雜合子小鼠（+/flox）進行自交，獲得F2代純合子小鼠（flox/flox）。

報告基因（Reporter/Tag）小鼠模型

指在目的基因的位置引入報告基因（如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等）或標(biāo)記基因的小鼠模型，通過報告基因的表達監(jiān)控目的基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性、監(jiān)控目的蛋白的表達定位及細胞轉(zhuǎn)運。

人源化（Humanized）小鼠模型

指帶有功能性的人類基因、細胞、組織或器官的小鼠模型，通常被用做人類疾病體內(nèi)研究的活體替代模型。本服務(wù)內(nèi)容涉及到的是指帶有功能性人類基因的小鼠模型。

Rosa26位點基因敲入小鼠模型

指在Rosa26位點引入某種基因的轉(zhuǎn)基因小鼠模型。傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠一般通過利用質(zhì)粒進行受精卵原核注射的方式來制備，通常會得到多個品系（Founders)。不同品系由于質(zhì)粒在染色體上的整合位點不同、拷貝數(shù)不同，不同品系之間不容易得到一致的結(jié)果。而且由于轉(zhuǎn)基因小鼠傳代后，轉(zhuǎn)基因的拷貝數(shù)稀釋以及基因沉默等原因，同一品系的表型在傳代過程中也很容易丟失，造成實驗結(jié)果不能重復(fù)?，F(xiàn)在大部分實驗室都是通過定點轉(zhuǎn)基因的方式來制備轉(zhuǎn)基因小鼠。其中用的最多的位點是Rosa26位點。

條件性點突變小鼠模型-誘導(dǎo)性（Inducible）

指在誘導(dǎo)劑的作用下，點突變能在特定的時間點被引入特定細胞或組織中目的基因位置的動物模型。誘導(dǎo)前表達野生型蛋白；誘導(dǎo)后，突變的蛋白在全身所有特定的細胞或組織中表達。

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【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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