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產(chǎn)品介紹

基因敲除敲入技術(shù)一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統(tǒng)可以有效的實現(xiàn)對細胞系特定基因的敲除和定點突變。

近10年來，mRNA在醫(yī)學應用領域取得顯著進展。研究人員可快速合成任意序列的mRNA片段，并能保存在室溫條件下。在無細胞的體系中利用DNA轉(zhuǎn)錄生成cap和poly A修飾的mRNA分子穩(wěn)定性良好，而修飾堿基的mRNA在穩(wěn)定性上更獲得大幅提升。在研究基因敲除動物及其胚胎發(fā)育中的基因表達時，科研人員往往都采用卵母細胞的mRNA顯微注射的方法，該方法在ZFN、TALEN、CRISPR、重編程細胞多能性等技術(shù)中得到廣泛應用。在這些基因編輯過程中使用mRNA較之DNA有諸多優(yōu)點，例如無需進入核內(nèi)并轉(zhuǎn)錄效率更快，RNA易降解也避免基因組遺傳重組現(xiàn)象。

我們利用該技術(shù)，定點敲除和修飾各種細胞系中的特定基因。對打靶細胞進行藥物篩選，利用CRISPR/Cas系統(tǒng)獲得的基因敲除細胞的剔除效率會明顯高于常規(guī)的利用RNAi和shRNA介導的基因敲落。

技術(shù)特色

1.可實現(xiàn)多個靶基因位點及多個基因的同時敲除
2.最新Nickase酶/雙gRNA技術(shù)，顯著降低脫靶率
3.無種屬限制，適用于各種細胞系的靶向敲除

操作流程

靶向目標序列sgRNA的設計及載體構(gòu)建

目標細胞系共轉(zhuǎn)染

陽性細胞株的篩選和鑒定

應用范疇

基因功能分析：在細胞水平研究基因的功能

定點突變：建立點突變細胞，可用于藥物靶點研究。

啟動子功能分析：該方法建立的啟動子分析系統(tǒng)，可有效地分析內(nèi)源性啟動子的強度，是一種最理想的分析系統(tǒng)。

參考細胞系

腫瘤細胞系： BEL-7402人肝癌細胞 CNE人鼻咽癌細胞 Hela人宮頸癌細胞 MCF-7人乳腺癌細胞等

神經(jīng)細胞系：SK-N-SH人神經(jīng)母瘤細胞

卵巢細胞系：SK-OV-3人卵巢癌細胞

血管平滑肌細胞系：VSMC血管平滑肌

成纖維細胞系：包皮成纖維細胞，心肌成纖維細胞

肺細胞系：SK-MES-1人肺鱗癌細胞 NCI-H460人大細胞肺癌細胞 A549人非小細胞肺癌細胞

腎細胞系：NRK腎小球足細胞

巨噬細胞：MH-S小鼠肺泡巨噬細胞 RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 THP-1人單核巨噬細胞

內(nèi)皮細胞：HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細胞

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具體CRISPR /Cas9細胞建系技術(shù)定制服務，歡迎聯(lián)系我們

威斯騰實驗服務流程

威斯騰生物服務項目

【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產(chǎn)權(quán)服務！
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