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科研服務(wù)

CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/入

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細(xì)胞系基因靶向操作服務(wù)

時間：2020-07-17 16:42:00 瀏覽：30177次

基因敲除敲入技術(shù)一直是研究特定基因功能的有效工具。威斯騰生物利用最新的CRISPR/Cas系統(tǒng)可以有效的實現(xiàn)對細(xì)胞系特定基因的敲除和定點突變。

技術(shù)原理

Clustered Regularly Interspaced Short PalindromicRepeats（CRISPR）/Cas是細(xì)菌和古細(xì)菌不斷進(jìn)化而獲得的免疫防御機(jī)制，其中II型CRISPR/Cas免疫系統(tǒng)依賴Cas9內(nèi)切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系統(tǒng)通過小導(dǎo)向RNA(sgRNA)對切割區(qū)域進(jìn)行識別，進(jìn)而利用Cas9內(nèi)切酶實現(xiàn)靶向區(qū)域的切割以產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂。該系統(tǒng)靈活簡單，可實現(xiàn)多個靶點的同時操作。目前我們采用Double Nicking技術(shù)，顯著降低脫靶率。

我們利用該技術(shù)，定點敲除和修飾各種細(xì)胞系中的特定基因。對打靶細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選，利用CRISPR/Cas系統(tǒng)獲得的基因敲除細(xì)胞的剔除效率會明顯高于常規(guī)的利用RNAi和shRNA介導(dǎo)的基因敲落。

技術(shù)特色
1. 可實現(xiàn)多個靶基因位點及多個基因的同時敲除
2. 最新Nickase酶/雙gRNA技術(shù)，顯著降低脫靶率
3. 無種屬限制，適用于各種細(xì)胞系的靶向敲除
4. 服務(wù)周期短，2個月即可交付陽性細(xì)胞
服務(wù)內(nèi)容

靶向目標(biāo)序列g(shù)RNA的設(shè)計及載體構(gòu)建

目標(biāo)細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染

陽性細(xì)胞株的篩選和鑒定

應(yīng)用范疇

基因功能分析：在細(xì)胞水平研究基因的功能

定點突變：:建立點突變細(xì)胞，可用于藥物靶點研究。

啟動子功能分析：該方法建立的啟動子分析系統(tǒng)，可有效地分析內(nèi)源性啟動子的強(qiáng)度，是一種最理想的分析系統(tǒng)。

服務(wù)流程

本平臺可制備的動物模型（部分）

疾病	方法	動物	模型成功率	操作難度	耗時程度
帕金森疾病	6-OHDA腦立體定位注射	Rat	70%~80%	簡單	比較耗時
帕金森疾病	MPTP、IP或SC注射（急性or慢性）	Mouse	70%	簡單	快速
抑郁癥	禁食、禁水、夾尾、冰水等慢性不可知刺激	Rat	80%	簡單	非常耗時
抑郁癥	利血平藥物注射或者懸尾和強(qiáng)迫游泳	Mouse	60%	簡單	非常耗時
脊髓損傷	脊髓半切、全斷、牽張、擠壓、打擊等	Rat	80%	普通	非常耗時
腦外損傷	顱腦損傷儀打擊致?lián)p	Rat	80%	普通	比較耗時
坐骨神經(jīng)損傷（周圍神經(jīng)損傷）	切斷或者夾閉神經(jīng)（手術(shù)）	Rat	90%	簡單	一般
心肌缺血	心臟冠狀動脈左前降支結(jié)扎	Rat	60%~70%	較難	非常耗時
心力衰竭	腹主動脈縮窄手術(shù)致心力衰竭	Rat	90%	簡單	快速
肺動脈高壓	手術(shù)分流術(shù)和MCT IP或SC注射	Rat	80%	普通	一般
高血壓	單腎單夾腎血管或者兩腎一夾型腎血管	Rat	80%	簡單	快速
粥樣動脈硬化	高脂飲食+VD3喂養(yǎng)	Rat/Mouse	50%	簡單	非常耗時
大腦中動脈阻塞（MCAO）	線栓法制備	Rat	70%	普通	比較耗時
慢性支氣管炎	煙熏	Rat	80%	簡單	耗時
過敏性哮喘	OVA+氫氧化鋁致敏	Rat/Mouse	80%	普通	耗時
肺炎模型	鮑曼不動桿菌氣道滴注	Rat/Mouse	90%	簡單	快速
肝炎—肝硬化—肝癌	DEN誘導(dǎo)	Rat	80%	簡單	比較耗時
肝纖維化	CCL4誘導(dǎo)	Rat	80%	簡單	耗時
膽結(jié)石模型	喂養(yǎng)致石飼料	Mouse	90%	簡單	一般
急性胰腺炎	牛黃膽酸鈉胰膽管注射	Rat	90%	普通	快速
急性腎衰竭	順鉑尾靜脈注射/腎動脈缺血	Rat	80%	普通	一般
體內(nèi)血栓	手術(shù)或者藥物誘導(dǎo)	Mouse	60-70%	普通	比較耗時
關(guān)節(jié)炎模型	Ⅱ型膠原+佐劑誘導(dǎo)	Rat/Mouse	90%	簡單	一般
Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病	STZ或增加高脂飼料喂養(yǎng)藥物誘導(dǎo)	Rat/Mouse	80%	簡單	比較耗時
荷瘤鼠/裸鼠成瘤	皮下成瘤	BALB/cA-nu mice	90%	簡單	一般
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