科研服務(wù) 時間：2020-07-22 17:06:00 瀏覽：29922次
一、TUNEL 技術(shù)簡介：
TUNEL 技術(shù), 即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介導(dǎo)的x2dU TP 缺口末端標(biāo)記(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技術(shù), 是目前原位檢測細(xì)胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法, 已廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。
TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測細(xì)胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細(xì)胞凋亡有一項重要的特征為細(xì)胞內(nèi)的DNA會碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測DNA片段的產(chǎn)生,所以可以傳達細(xì)胞凋亡的訊息.TdT為terminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結(jié)核甘酸到DNA的3'-OH處.1992年,以色列科學(xué)家Gavrieli等人將TdT引為為標(biāo)定DNA片段的一個酵素,自此衍生出TUNEL此項技術(shù).TUNEL的好處是可以在細(xì)胞凋亡發(fā)生的早期,即可偵測到DNA片段的產(chǎn)生,并且可以直接使用在組織切片上,觀察細(xì)胞凋亡發(fā)生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細(xì)胞凋亡的分析方法。
二、試劑與儀器
試劑
1．TUNEL試劑盒：購自羅氏公司
2．DAB：Sigma
3．PBS和TBS緩沖液：國藥集團
儀器
切片機：德國Leica，RM2145型
展片機：德國Leica，HI1210型
烤片機：德國Leica，HI1220型
三、操作流程
1、石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水; 石蠟切片4um貼在涂有切片粘合劑的載玻片上，58。C烤24h，常規(guī)脫蠟至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分鐘，無水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分鐘，水洗2分鐘。
2、0.3%H2O2作用 30min,室溫，PBS洗3min×3次；
3、Proteinase K 20ug/ml37℃20min
4、PBS洗3min×3次；
5、0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次；
6、PBS洗3min×3次；
7、TUNEL混合液---1ml Tunel緩沖液中加入10ul b-11-DUTP, 10ul TDT,37C1h,室溫1h
8、PBS洗3min×3次；
9、Streptavidin-HRP 1:40037C30min
10、PBS洗3min×3次；
11、0.04%DAB+0.03%H2O2顯色10min，流水洗
12、蘇木精襯染1min，鹽酸乙醇分化，水洗
13、常規(guī)樹脂封片
四、結(jié)果提供：陽性結(jié)果為棕黃色（核）或棕褐色，背景呈紫藍(lán)色。
1、完整的實驗報告（包含試劑、耗材、操作步驟、病理結(jié)果）；
2、原始病理照片，一般提供100倍、400倍照片各2張；
3、如果客戶提供的是組織，我們提供包埋、染色片
五、樣本要求
取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜），立即放入固定液（固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液，體積為組織塊的10倍以上）中，避免干燥；對于有血跡的樣本，可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中；經(jīng)固定后的樣本必須在48小時內(nèi)處理
結(jié)果展示
威斯騰實驗服務(wù)流程：
威斯騰生物服務(wù)項目
| 分子生物學(xué)檢測 | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實驗服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝純化 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細(xì)胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細(xì)胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細(xì)胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| 生長因子芯片 | 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 信號通路磷酸化水平檢測芯片 | 心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細(xì)胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 生長因子芯片 | 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因編輯動物 | |
| 趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實驗服務(wù) |
| HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 膜片鉗實驗 | |
| 細(xì)胞生物學(xué) | 高通量測序 | 代謝組學(xué) |
| 細(xì)胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細(xì)胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細(xì)胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細(xì)胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學(xué)相關(guān)實驗 |
| Transwell細(xì)胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活性 | 單細(xì)胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細(xì)胞學(xué)實驗 | circleRNA測序 | |
| 細(xì)胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細(xì)胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞生物學(xué)整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞成管實驗 | ||
| 病理學(xué)檢測 | CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細(xì)胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細(xì)胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細(xì)胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細(xì)胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細(xì)胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 |
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| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等） |
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| 行為學(xué)檢測 | 藥物篩選服務(wù)項目 | 藥效學(xué)評價 |
| 水迷宮實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 曠場實驗 | 細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價 |
| 重復(fù)性刻板行為檢測 | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 動物跑臺檢測 | 分子藥理研究平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 強迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價 |
【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理染色檢測、細(xì)胞敲除&敲入、模式與轉(zhuǎn)基因動物、SPF動物保種、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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