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威斯騰生物經(jīng)過(guò)10多年的發(fā)展，獲得了上百種細(xì)胞株和四十余種原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，并建立了龐大的細(xì)胞庫(kù)及原代培養(yǎng)資料庫(kù)。細(xì)胞平臺(tái)有資深實(shí)驗(yàn)員、規(guī)范的SOP操作文件，萬(wàn)級(jí)凈化細(xì)胞房，這些條件為保質(zhì)保量完成每個(gè)客戶的實(shí)驗(yàn)提供了保障。 同時(shí)，威斯騰生物結(jié)合多年原代及傳代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合平臺(tái)已有的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，建立了完善的體外藥篩實(shí)驗(yàn)，并引進(jìn)RTCA(Real-time cellular Analysis，實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞記錄儀），在藥篩過(guò)程中，全程實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞真實(shí)狀況，為藥篩提供最真實(shí)精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

無(wú)菌操作注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)的無(wú)菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風(fēng)30min，操作前需要換細(xì)胞間專(zhuān)用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實(shí)驗(yàn)服，戴上一次性口罩和帽子，操作時(shí)不能大聲說(shuō)話，整個(gè)無(wú)菌操作都應(yīng)該在酒精燈的周?chē)M(jìn)行。

新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代分離培養(yǎng)

操作方法

（1）取成年新西蘭大白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后，取下兔子的雙腿，立即用75%乙醇浸泡。

（2）移入細(xì)胞房?jī)?nèi)，去除雙腿表面的皮毛及肌肉，剪取關(guān)節(jié)段，移至超菌工作臺(tái)內(nèi)。

（3）PBS洗滌數(shù)次，用手術(shù)刀或彎剪將關(guān)節(jié)表面的軟骨組織取下。

（4）軟骨組織塊靜置5min，棄去上層液體及懸浮組織，將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化15-20min；

（5） 4℃靜置5min；棄上清，PBS洗滌，去上清。加入0.2%膠原酶II，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化2H；
（6）加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基終止消化，反復(fù)吹打后依次通過(guò)200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min，棄上清，用DMEM完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞, 放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

（7）細(xì)胞傳代后放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞完全展開(kāi)后即可固定做原代鑒定。

細(xì)胞形態(tài)

膝關(guān)節(jié)軟骨原代培養(yǎng)過(guò)程中，約24小時(shí)即可出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞三角或多角形，生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)3-5天進(jìn)入快速增殖期。

大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的原代培養(yǎng)

操作方法

（1）取四周齡SD大鼠，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺(tái)內(nèi)，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺(tái)面的泡沫板上。

（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無(wú)菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離大腿腿骨，盡可能去除筋膜、肌肉和結(jié)締組織；從關(guān)節(jié)處分離出軟骨組織，將其剪成小于1mm3的組織塊，用含雙抗的PBS溶液沖洗兩遍。

（3）軟骨組織塊靜置5min，棄去上層液體及懸浮組織，往離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化15-20min；

（4） 4℃靜置5min；棄上清，加入0.2%膠原酶II，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化30～60min；
（5）加入生長(zhǎng)培養(yǎng)基終止消化，反復(fù)吹打后依次通過(guò)200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min，棄上清，用DMEM完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞, 放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

（7）放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)。每3天更換培養(yǎng)液至第5天改為無(wú)血清培養(yǎng)液。免疫組化鑒定原代細(xì)胞。

細(xì)胞形態(tài)

膝關(guān)節(jié)軟骨原代培養(yǎng)過(guò)程中，約24小時(shí)即可出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞三角或多角形，生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)3-5天進(jìn)入快速增殖期。

威斯騰實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目

【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、病理學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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