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CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/入
CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞系

時(shí)間:2020-07-21 14:14:00 瀏覽:32384次

CRISPR/Cas9提高了基因編輯的準(zhǔn)確性和特異性,使以前不可能開展的實(shí)驗(yàn)成為可能。它的效率是傳統(tǒng)ZFN和TALEN系統(tǒng)的三到四倍。而且,只需導(dǎo)入幾個(gè)不同的引導(dǎo)RNA,即可刪除多個(gè)基因。該技術(shù)已廣泛用于構(gòu)建敲除細(xì)胞系,在這類細(xì)胞系中,靶標(biāo)基因可以精確刪除,從而完全去除其編碼的蛋白質(zhì)。根據(jù)不同細(xì)胞特點(diǎn)選擇適宜的轉(zhuǎn)染方法(病毒法,化學(xué)轉(zhuǎn)染法或電轉(zhuǎn)法)將gRNA序列和Cas9蛋白轉(zhuǎn)入細(xì)胞中,并根據(jù)不同的轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行不同時(shí)長的藥篩。藥篩完成后進(jìn)行單克隆篩選,通過靶位點(diǎn)擴(kuò)增及測序驗(yàn)證篩選出成功敲除的陽性克隆,最終交付純合子細(xì)胞株與相關(guān)數(shù)據(jù)報(bào)告。

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基因編輯細(xì)胞服務(wù)說明:

基因情況:單基因或者多基因敲除

細(xì)胞類型:貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞

服務(wù)承諾:提供單克隆細(xì)胞株

服務(wù)優(yōu)勢:

1. 速度:KO pool快至2周;KO單克隆純合子,快至1.5月;

2. 敲除保證:sgRNA 3~6條,確保獲得敲除株;

3. 多基因同敲:我司有兩種成熟的多基因敲除實(shí)驗(yàn)體系,可同時(shí)/至少靶向3個(gè)基因靶點(diǎn);

4. 團(tuán)隊(duì)專業(yè)    我司Cas9基因編輯團(tuán)隊(duì)目前已完成60余例細(xì)胞基因敲除案例,具備豐富的經(jīng)驗(yàn);

5. 種子優(yōu)良    所有細(xì)胞種子均從中科院細(xì)胞庫購買,代數(shù)低無污染;

6. 敲除無損    所有的敲除單克隆均通過多代次測序驗(yàn)證,確保敲除性狀穩(wěn)定不回復(fù);

7. 質(zhì)控嚴(yán)格    建系后連續(xù)3代細(xì)胞增殖活力評估。


基因敲除方案:
威斯騰生物根據(jù)客戶需求,結(jié)合靶基因的情況進(jìn)行方案定制。通常情況下,對于每個(gè)基因,我們會設(shè)計(jì)3條sgRNA,靶向切割位置靠前的外顯子區(qū)域,通過細(xì)胞自身的非同源修復(fù)機(jī)制,在切割位置產(chǎn)生堿基的突變、插入或部分DNA序列的刪除,造成錯義突變、無義突變、移碼突變、片段缺失,進(jìn)而影響下游RNA或蛋白的功能。

基因敲除1.png

此外,威斯騰生物CRISPR/Cas9研發(fā)團(tuán)隊(duì)推出pWST-KOS系列質(zhì)粒,可同時(shí)介導(dǎo)多個(gè)基因靶點(diǎn)的切割,實(shí)現(xiàn)基因的大片段刪除,或同時(shí)刪除多個(gè)基因!

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操作步驟:

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交付內(nèi)容:

1、經(jīng)測序驗(yàn)證的目的基因敲除細(xì)胞株及對照細(xì)胞株各2支,每支細(xì)胞量不少于1*106 Cells。

2、詳盡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括細(xì)胞株培養(yǎng)信息、實(shí)驗(yàn)步驟;sgRNA序列及測序峰圖;單克隆篩選測序驗(yàn)證報(bào)告。


威斯騰生物服務(wù)流程



威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目

分子生物學(xué)類蛋白質(zhì)與免疫學(xué)動物實(shí)驗(yàn)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP)多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)技術(shù)Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù)脊髓損傷模型
生化指標(biāo)檢測蛋白雙向電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)腦外損傷模型
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測原核蛋白表達(dá)純化骨神經(jīng)損傷模型
染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)真核蛋白表達(dá)純化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)心力衰竭模型

SLAC蛋白組學(xué)肺動脈高血壓動物模型


高血壓模型
病毒類實(shí)驗(yàn)課題整體外包粥樣動脈硬化模型
過表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
過表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化細(xì)胞整體實(shí)驗(yàn)外包慢性之氣管炎模型
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化動物整體實(shí)驗(yàn)外包過敏性哮喘模型
腺相關(guān)病毒包裝純化
肺炎大鼠模型


肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代細(xì)胞培養(yǎng)肝纖維化模型
細(xì)胞因子芯片骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)膽結(jié)石模型
生長因子芯片脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體內(nèi)血栓模型
生長因子芯片血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)關(guān)節(jié)炎模型
炎癥因子芯片神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng)裸鼠成瘤
凋亡因子芯片
基因編輯動物
趨化因子芯片電生理相關(guān)服務(wù)動物整體實(shí)驗(yàn)服務(wù)
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片膜片鉗實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞生物學(xué)高通量測序代謝組學(xué)
細(xì)胞原代培養(yǎng)mRNA測序氣相色譜GC/MS
MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
細(xì)胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
細(xì)胞周期檢測RNA-Seq測序
細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)外顯子測序影像學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)
Transwell細(xì)胞遷移/侵襲16s擴(kuò)增子測序Micro-CT
流式分選Small RNA測序小動物活體成像
CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活性單細(xì)胞測序PET-CT
藥物篩選細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)circleRNA測序
細(xì)胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
條件性敲除小鼠/大鼠
細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn)
全基因敲除小鼠/大鼠
細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)

病理類CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入基因芯片
掃描電鏡基因定點(diǎn)突變細(xì)胞系LncRNA芯片
透射電鏡單基因敲除細(xì)胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除細(xì)胞系mRNA芯片
免疫組化目的基因敲入細(xì)胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測報(bào)告基因敲入細(xì)胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系
免疫熒光

Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等)

行為學(xué)檢測藥物篩選服務(wù)項(xiàng)目藥效學(xué)評價(jià)
水迷宮實(shí)驗(yàn)高通量自動藥物篩選平臺神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià)
曠場實(shí)驗(yàn)細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價(jià)
重復(fù)性刻板行為檢測蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià)
動物跑臺檢測分子藥理研究平臺泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià)
強(qiáng)迫游泳生物膜片鉗藥物篩選平臺內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià)

常規(guī)藥物體外篩選抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價(jià)

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