
時(shí)間:2020-07-21 14:14:00 瀏覽:32384次
CRISPR/Cas9提高了基因編輯的準(zhǔn)確性和特異性,使以前不可能開展的實(shí)驗(yàn)成為可能。它的效率是傳統(tǒng)ZFN和TALEN系統(tǒng)的三到四倍。而且,只需導(dǎo)入幾個(gè)不同的引導(dǎo)RNA,即可刪除多個(gè)基因。該技術(shù)已廣泛用于構(gòu)建敲除細(xì)胞系,在這類細(xì)胞系中,靶標(biāo)基因可以精確刪除,從而完全去除其編碼的蛋白質(zhì)。根據(jù)不同細(xì)胞特點(diǎn)選擇適宜的轉(zhuǎn)染方法(病毒法,化學(xué)轉(zhuǎn)染法或電轉(zhuǎn)法)將gRNA序列和Cas9蛋白轉(zhuǎn)入細(xì)胞中,并根據(jù)不同的轉(zhuǎn)染方法進(jìn)行不同時(shí)長的藥篩。藥篩完成后進(jìn)行單克隆篩選,通過靶位點(diǎn)擴(kuò)增及測序驗(yàn)證篩選出成功敲除的陽性克隆,最終交付純合子細(xì)胞株與相關(guān)數(shù)據(jù)報(bào)告。
基因編輯細(xì)胞服務(wù)說明:
基因情況:單基因或者多基因敲除
細(xì)胞類型:貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞
服務(wù)承諾:提供單克隆細(xì)胞株
服務(wù)優(yōu)勢:
1. 速度:KO pool快至2周;KO單克隆純合子,快至1.5月;
2. 敲除保證:sgRNA 3~6條,確保獲得敲除株;
3. 多基因同敲:我司有兩種成熟的多基因敲除實(shí)驗(yàn)體系,可同時(shí)/至少靶向3個(gè)基因靶點(diǎn);
4. 團(tuán)隊(duì)專業(yè) 我司Cas9基因編輯團(tuán)隊(duì)目前已完成60余例細(xì)胞基因敲除案例,具備豐富的經(jīng)驗(yàn);
5. 種子優(yōu)良 所有細(xì)胞種子均從中科院細(xì)胞庫購買,代數(shù)低無污染;
6. 敲除無損 所有的敲除單克隆均通過多代次測序驗(yàn)證,確保敲除性狀穩(wěn)定不回復(fù);
7. 質(zhì)控嚴(yán)格 建系后連續(xù)3代細(xì)胞增殖活力評估。
基因敲除方案:
威斯騰生物根據(jù)客戶需求,結(jié)合靶基因的情況進(jìn)行方案定制。通常情況下,對于每個(gè)基因,我們會設(shè)計(jì)3條sgRNA,靶向切割位置靠前的外顯子區(qū)域,通過細(xì)胞自身的非同源修復(fù)機(jī)制,在切割位置產(chǎn)生堿基的突變、插入或部分DNA序列的刪除,造成錯義突變、無義突變、移碼突變、片段缺失,進(jìn)而影響下游RNA或蛋白的功能。
此外,威斯騰生物CRISPR/Cas9研發(fā)團(tuán)隊(duì)推出pWST-KOS系列質(zhì)粒,可同時(shí)介導(dǎo)多個(gè)基因靶點(diǎn)的切割,實(shí)現(xiàn)基因的大片段刪除,或同時(shí)刪除多個(gè)基因!
操作步驟:
交付內(nèi)容:
1、經(jīng)測序驗(yàn)證的目的基因敲除細(xì)胞株及對照細(xì)胞株各2支,每支細(xì)胞量不少于1*106 Cells。
2、詳盡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括細(xì)胞株培養(yǎng)信息、實(shí)驗(yàn)步驟;sgRNA序列及測序峰圖;單克隆篩選測序驗(yàn)證報(bào)告。
威斯騰生物服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目
分子生物學(xué)類 | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動物實(shí)驗(yàn) |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)技術(shù) | Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
生化指標(biāo)檢測 | 蛋白雙向電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 腦外損傷模型 |
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測 | 原核蛋白表達(dá)純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表達(dá)純化 | 心肌缺血模型 |
GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
SLAC蛋白組學(xué) | 肺動脈高血壓動物模型 | |
高血壓模型 | ||
病毒類 | 實(shí)驗(yàn)課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
過表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
過表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化 | 細(xì)胞整體實(shí)驗(yàn)外包 | 慢性之氣管炎模型 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實(shí)驗(yàn)外包 | 過敏性哮喘模型 |
腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
蛋白芯片 | 原代細(xì)胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
細(xì)胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
生長因子芯片 | 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
信號通路磷酸化水平檢測芯片 | 心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細(xì)胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
生長因子芯片 | 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
凋亡因子芯片 | 基因編輯動物 | |
趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 膜片鉗實(shí)驗(yàn) | |
細(xì)胞生物學(xué) | 高通量測序 | 代謝組學(xué) |
細(xì)胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
細(xì)胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
細(xì)胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) | 外顯子測序 | 影像學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn) |
Transwell細(xì)胞遷移/侵襲 | 16s擴(kuò)增子測序 | Micro-CT |
流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活性 | 單細(xì)胞測序 | PET-CT |
藥物篩選細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn) | circleRNA測序 | |
細(xì)胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn) | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn) | ||
病理類 | CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
掃描電鏡 | 基因定點(diǎn)突變細(xì)胞系 | LncRNA芯片 |
透射電鏡 | 單基因敲除細(xì)胞系 | miRNA芯片 |
HE染色 | 多基因敲除細(xì)胞系 | mRNA芯片 |
免疫組化 | 目的基因敲入細(xì)胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本) |
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 | 報(bào)告基因敲入細(xì)胞系 | SNP芯片(限人和小鼠來源樣本) |
激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系 | |
免疫熒光 | ||
Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | |
原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | |
熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等) | ||
行為學(xué)檢測 | 藥物篩選服務(wù)項(xiàng)目 | 藥效學(xué)評價(jià) |
水迷宮實(shí)驗(yàn) | 高通量自動藥物篩選平臺 | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià) |
曠場實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價(jià) |
重復(fù)性刻板行為檢測 | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià) |
動物跑臺檢測 | 分子藥理研究平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià) |
強(qiáng)迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價(jià) |
常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價(jià) |
科研服務(wù)高品質(zhì)供應(yīng)商
全國免費(fèi)熱線:400-675-6758
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