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威斯騰生物經(jīng)過10多年的發(fā)展，獲得了上百種細(xì)胞株和四十余種原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗，并建立了龐大的細(xì)胞庫及原代培養(yǎng)資料庫。細(xì)胞平臺有資深實驗員、規(guī)范的SOP操作文件，萬級凈化細(xì)胞房，這些條件為保質(zhì)保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時，威斯騰生物結(jié)合多年原代及傳代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗，結(jié)合平臺已有的技術(shù)優(yōu)勢，建立了完善的體外藥篩實驗，并引進(jìn)RTCA(Real-time cellular Analysis，實時無標(biāo)記細(xì)胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實時記錄細(xì)胞真實狀況，為藥篩提供最真實精準(zhǔn)的實驗數(shù)據(jù)。

無菌操作注意事項

細(xì)胞培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風(fēng)30min，操作前需要換細(xì)胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，操作時不能大聲說話，整個無菌操作都應(yīng)該在酒精燈的周圍進(jìn)行。

小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的原代分離培養(yǎng)

1、培養(yǎng)板的包被

用0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養(yǎng)板和小玻片，37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

吸棄 L-多聚賴氨酸溶液，滅菌去離子水漂洗培養(yǎng)孔及小玻片，晾干備用。

2、小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的分離及培養(yǎng)

（1）75%（體積分?jǐn)?shù)）酒精消毒新生24h內(nèi)的健康C57小鼠，在無菌條件下脫頸處死，剪開頭皮及顱骨，取出腦組織，置于盛冷的pH7.2，無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

（2）無菌分離海馬組織。保持腦組織背面朝上，在鏡下小心翻開大腦皮質(zhì)，暴露海馬，用眼科剪或尖鑷分離海馬周圍組織，取出放入盛有D-Hank's液的平皿中。

（3）用虹膜剪將組織剪切成1mm3左右的組織塊，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 20min，期間振搖 2~3 次。

（4）棄去上清液，加入完全接種液終止消化，漂洗2次。巴斯德吸管輕輕吹打 20次，制成細(xì)胞懸液，靜置 2min。

（5）懸液收集于新的離心管，離心（1000rpm，10 min，4℃），棄去上清液。加入完全培養(yǎng)液重懸，200 目不銹鋼網(wǎng)過濾。

（6）將濾液進(jìn)行臺盼藍(lán)拒染試驗,血細(xì)胞計數(shù)板鏡下計數(shù)。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細(xì)胞以400μL/孔接種到預(yù)先用L-多聚賴氨酸包被的24孔培養(yǎng)板或 100μL/孔接種 96 孔培養(yǎng)板。

（7）置 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 4-6h，全量更換為無血清培養(yǎng)液。

（8）體外培養(yǎng)第3d，加入Ara-C-工作液，以抑制非神經(jīng)細(xì)胞過度增殖，作用 24 h后吸出。

（9）此后每 3d半量換液1次 , 體外培養(yǎng)第 7～21d的細(xì)胞用于實驗。

大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的分離及培養(yǎng)

1、培養(yǎng)板的包被

（1）將蓋玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小，洗潔精浸洗、烘干。

（2）經(jīng) 5%鹽酸浸泡30min，自來水沖洗20min，三蒸水沖洗，浸泡過夜并烘干；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精燈烤干，放入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板。

（3）用 0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養(yǎng)皿和小玻片，37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

吸棄 L-多聚賴氨酸溶液，滅菌去離子水漂洗培養(yǎng)孔及小玻片，晾干備用。

2、大鼠脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的分離及培養(yǎng)

(1) 75%（體積分?jǐn)?shù)）酒精消毒新生 24h 內(nèi)的健康SD大鼠，在無菌條件下斷頭，分離并切取脊髓，置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

(2) 無菌條件下仔細(xì)剝離脊膜及血管。

(3) 用虹膜剪將組織剪切成 1mm3左右的組織塊，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 10min，期間振搖 2~3 次。

（4）巴斯德吸管輕輕吹打 20次，靜置 5min，將細(xì)胞上清移入新的無菌離心管，加入完全接種液終止消化。剩余組織按照上述步驟繼續(xù)消化，重復(fù)2-3次，制成細(xì)胞懸液。

（5）將新的離心管中細(xì)胞懸液，離心（1000r/min，10 min，4℃），棄去上清液。加入完全培養(yǎng)液重懸，200 目不銹鋼網(wǎng)過濾。

（6）將濾液進(jìn)行臺盼藍(lán)拒染試驗,血細(xì)胞計數(shù)板鏡下計數(shù)。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細(xì)胞以 400μl/孔接種到預(yù)先用L-多聚賴氨酸包被的24 孔培養(yǎng)板

（7）置 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 4～6h，全量更換為無血清培養(yǎng)液。

（8）體外培養(yǎng)第 3天，加入Ara-C 工作液，以抑制非神經(jīng)細(xì)胞過度增殖，作用 24 h后吸出。

(9) 此后每 3d半量換液1次 , 體外培養(yǎng)第 7～21天的細(xì)胞用于實驗。

威斯騰實驗服務(wù)流程

威斯騰生物服務(wù)項目

分子生物學(xué)類	蛋白質(zhì)與免疫學(xué)	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù)	Western-blot 實驗服務(wù)	脊髓損傷模型
生化指標(biāo)檢測	蛋白雙向電泳實驗服務(wù)	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達(dá)純化	骨神經(jīng)損傷模型
染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達(dá)純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學(xué)	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒類	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化	細(xì)胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關(guān)病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細(xì)胞培養(yǎng)	肝纖維化模型
細(xì)胞因子芯片	骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)	膽結(jié)石模型
生長因子芯片	脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細(xì)胞培養(yǎng)	體內(nèi)血栓模型
生長因子芯片	血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)	關(guān)節(jié)炎模型
炎癥因子芯片	神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng)	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關(guān)服務(wù)	動物整體實驗服務(wù)
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細(xì)胞生物學(xué)	高通量測序	代謝組學(xué)
細(xì)胞原代培養(yǎng)	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細(xì)胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細(xì)胞周期檢測	RNA-Seq測序
細(xì)胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學(xué)相關(guān)實驗
Transwell細(xì)胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活性	單細(xì)胞測序	PET-CT
藥物篩選細(xì)胞學(xué)實驗	circleRNA測序
細(xì)胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細(xì)胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細(xì)胞生物學(xué)整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細(xì)胞成管實驗
病理類	CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細(xì)胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細(xì)胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細(xì)胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細(xì)胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細(xì)胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等）
行為學(xué)檢測	藥物篩選服務(wù)項目	藥效學(xué)評價
水迷宮實驗	高通量自動藥物篩選平臺	神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
曠場實驗	細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺	抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價
重復(fù)性刻板行為檢測	蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺	心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
動物跑臺檢測	分子藥理研究平臺	泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
強迫游泳	生物膜片鉗藥物篩選平臺	內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價
	常規(guī)藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價

【本平臺合作項目】