科研服務(wù) 時(shí)間：2020-07-21 13:49:00 瀏覽：42086次
免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western
blotting)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。
二、威斯騰生物|WB實(shí)驗(yàn)儀器：
高速組織搗碎機(jī)： SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型號(hào)：PT1600E）
電泳儀：北京六一儀器廠（型號(hào)：DYY-8C）
電泳槽：北京六一儀器廠（型號(hào)：DYCZ-24D）
轉(zhuǎn)印槽：北京六一儀器廠（型號(hào)：DYCZ-40D）
低溫高速離心機(jī)：湖南湘儀公司（型號(hào)：H2050R）
超低溫冰箱：美國(guó)FORMA公司（型號(hào)：702）
分光光度計(jì)：上海分析儀器總廠（型號(hào)：721）
脫色搖床：上海琪特分析儀器有限公司（型號(hào)：STS-2）
三、WB技術(shù)操作步驟：
1 樣品準(zhǔn)備
1）分別取大約200mg組織加入液氮碾磨成粉末狀，按每200mg組織加900μl上樣Buffer(無(wú)溴酚藍(lán))和100ul 10mg/ml PMSF，混勻，玻璃勻漿器冰點(diǎn)勻漿；
2）
3）取上清夜
4）
2 定蛋白及計(jì)算電泳上樣量
根據(jù)總蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定樣本中的總蛋白含量，電泳上樣量定為40ug
3 電泳
1）安裝好電泳裝置；
2）根據(jù)不同的指標(biāo)配制相應(yīng)濃度的分離膠，灌膠約3/5體積，液封(<10%用0.1%SDS,>10%用異丙醇)；
3）30min后，待凝后傾去封液；
4）配5%的濃縮膠，灌膠至距平板頂部
5）上樣：各樣品取50ug上樣，marker取10μl上樣(上樣前需按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行預(yù)處理)；
6）緩慢加入內(nèi)、外槽緩沖液，接通電源，90v電泳至指示劑進(jìn)入分離膠后，調(diào)電壓至150V繼續(xù)電泳；
7）當(dāng)指示劑距平板底端
4 轉(zhuǎn)膜及檢測(cè)
1）準(zhǔn)備2個(gè)
2）取下膠，切除濃縮膠部分后，將分離膠浸入轉(zhuǎn)移緩沖液中約5min；
3）按順序安裝好轉(zhuǎn)膜裝置（黑色板-海綿-三層濾紙-凝膠-硝酸纖維膜-三層濾紙-海綿-紅色板）；
4）完全排除氣泡，
5）傾去轉(zhuǎn)膜緩沖液，拆除轉(zhuǎn)膜裝置，將硝酸纖維膜放入麗春紅中搖床染色15min，用去離子水清洗至能看到條帶，后用鉛筆標(biāo)出marker位置，再用去離子水震蕩以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右；
6）將膜轉(zhuǎn)移至另一容器中，用5%脫脂奶粉封閉,
7）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的一抗；
8）
9）PBST洗滌4次，每次5min；
10）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的二抗，
11）PBST洗滌4次，每次5min；
12）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入BCIP/NBT底物，室溫孵育30min；
13）取出NC膜，用蒸餾水漂洗后晾干；
14）掃描及分析。
四、威斯騰生物|WB服務(wù)要求：
1、樣本要求：組織樣品，每份樣本約250-500mg,新鮮或正確保存的組織。細(xì)胞樣本：每份樣本：1*10 6－1*10 7細(xì)胞數(shù)。
2、客戶提供有效的一抗，（國(guó)產(chǎn)抗體一般不接納） 一抗自備或代購(gòu)。
3、客戶提供欲檢測(cè)目的蛋白的詳細(xì)背景資料。以及提供樣本的種屬，類型。
五、威斯騰生物|WB服務(wù)結(jié)果提供：
1、目的蛋白實(shí)驗(yàn)圖片。
2、灰度分析結(jié)果。（免費(fèi)分析）
3、內(nèi)參結(jié)果。（免費(fèi)跑膠）
4、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。
5、免費(fèi)提供蛋白樣本保存液。
六、威斯騰生物|WB實(shí)驗(yàn)周期：
接受樣本后，1-2個(gè)月。
七、威斯騰生物|WB實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1、客戶要確保檢測(cè)樣本沒(méi)有問(wèn)題。
2、客戶要確?？贵w的有效性。
3、實(shí)驗(yàn)周期比較緊張的客戶需特別說(shuō)明。
4、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：以每張膜8個(gè)樣本收費(fèi)，不足8個(gè)樣本的按8個(gè)樣本收費(fèi)）
八、威斯騰生物服務(wù)流程：
九、威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目
| 分子生物學(xué)檢測(cè) | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 實(shí)時(shí)熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動(dòng)物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測(cè) | 蛋白雙向電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) | 原核蛋白表達(dá)純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達(dá)純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動(dòng)脈高血壓動(dòng)物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝純化 | 實(shí)驗(yàn)課題整體外包 | 粥樣動(dòng)脈硬化模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動(dòng)脈阻塞模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化 | 細(xì)胞整體實(shí)驗(yàn)外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)外包 | 過(guò)敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細(xì)胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細(xì)胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 信號(hào)通路磷酸化水平檢測(cè)芯片 | 心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細(xì)胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因編輯動(dòng)物 | |
| 趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
| HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 膜片鉗實(shí)驗(yàn) | |
| 細(xì)胞生物學(xué) | 高通量測(cè)序 | 代謝組學(xué) |
| 細(xì)胞原代培養(yǎng) | mRNA測(cè)序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測(cè) | LncRNA測(cè)序 | 液相色譜LC/MS |
| 細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 全基因組測(cè)序 | 核磁共震NMR |
| 細(xì)胞周期檢測(cè) | RNA-Seq測(cè)序 | |
| 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) | 外顯子測(cè)序 | 影像學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn) |
| Transwell細(xì)胞遷移/侵襲 | 16s擴(kuò)增子測(cè)序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測(cè)序 | 小動(dòng)物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測(cè) | 宏基因組測(cè)序 | 核磁共振 |
| 臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活性 | 單細(xì)胞測(cè)序 | PET-CT |
| 藥物篩選細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn) | circleRNA測(cè)序 | |
| 細(xì)胞粘附性檢測(cè) | 甲基化測(cè)序 | 基因編輯動(dòng)物 |
| 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn) | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn) | ||
| 病理學(xué)檢測(cè) | CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點(diǎn)突變細(xì)胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細(xì)胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細(xì)胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細(xì)胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測(cè) | 報(bào)告基因敲入細(xì)胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動(dòng)物敲除/敲入 | |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等） |
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| 行為學(xué)檢測(cè) | 藥物篩選服務(wù)項(xiàng)目 | 藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 水迷宮實(shí)驗(yàn) | 高通量自動(dòng)藥物篩選平臺(tái) | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺(tái) | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 重復(fù)性刻板行為檢測(cè) | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺(tái) | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 動(dòng)物跑臺(tái)檢測(cè) | 分子藥理研究平臺(tái) | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 強(qiáng)迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺(tái) | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、病理學(xué)檢測(cè)、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
【全國(guó)免費(fèi)熱線】400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
【郵箱】 china-western@163.com
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