科研服務(wù) 時(shí)間：2020-07-22 17:13:00 瀏覽：48345次
一、Masson染色基本原理
Masson染色時(shí)膠原纖維呈藍(lán)色(被苯胺藍(lán)所染)，肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染),這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。不同的組織和細(xì)胞成分,它們的孔隙大小是不同的?？紫兜拇笮?決定了組織的滲透性。如孔隙小,組織結(jié)構(gòu)致密,滲透性低；孔隙寬,組織結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色,則可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞被最小分子的陰離子染料著染.肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染,而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說(shuō)明了紅細(xì)胞對(duì)陰離子染料的滲透性最小,肌纖維與胞質(zhì)次之,而膠原纖維具有最大的滲透性。根據(jù)組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子染料進(jìn)行染色,便可把不同組織成分顯示出來(lái).而染料分子的大小,主要由其分子量來(lái)體現(xiàn)。小分子量者易于穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織,而大分子最者則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織。一般來(lái)說(shuō),結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織多選擇大分子染料,而結(jié)構(gòu)致密,滲透性低的組織多選擇小分子染料。
三、實(shí)驗(yàn)主要試劑
Regaud 氏蘇木精：蘇木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸餾水80ml。
將蘇木精加入蒸餾水內(nèi)加溫溶解,冷卻后加入酒精和甘油,放數(shù)日后即可應(yīng)用。
Masson麗春紅酸性復(fù)紅液： 麗春紅0.7g，酸性復(fù)紅0.3g，蒸餾水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液： 冰醋酸0.2 ml，蒸餾水100 ml。
1%磷鉬酸水溶液：磷鉬酸1g，蒸餾水100 ml。
苯胺藍(lán)水溶液：苯胺藍(lán)2g，蒸餾水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光綠水溶液：光綠 1g，蒸餾水100 ml。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1． 石蠟切片脫蠟至水。
2． 鉻化處理或去汞鹽沉淀（甲醛固定的組織此步可略）。
3． 依次自來(lái)水和蒸餾水洗。
4． 用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10min。
5． 充分水洗,如過(guò)染可鹽酸酒精分化。
6． 蒸餾水洗。
7． 用Masson 麗春紅酸性復(fù)紅液5-10min。
8． 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9． 1%磷鉬酸水溶液分化3-5min。
10. 不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍(lán)或光綠液染5min。
11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12．95%酒精、無(wú)水酒精、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。
四、注意事項(xiàng)：
1．控制好染色步驟。
2．組織固定起著很重要的作用，根據(jù)不同的固定液可延長(zhǎng)或縮短染色時(shí)間。
3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色調(diào)清晰鮮艷。
4．磷鉬酸水溶液對(duì)麗春紅、酸性復(fù)紅有分化作用，分化時(shí)鏡下控制， 肌纖維和纖維素呈紅色，膠原纖維呈淡粉紅色即可。
五、結(jié)果提供 膠原纖維、粘液、軟骨呈藍(lán)色（如光綠液染色為綠色），胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色，胞核黑藍(lán)色。
1、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包含試劑、耗材、操作步驟、病理結(jié)果）；
2、原始病理照片，一般提供100倍、400倍照片各2張；
3、如果客戶提供的是組織，我們提供包埋、染色片
六、樣本要求
取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜），立即放入固定液（固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液，體積為組織塊的10倍以上）中，避免干燥；對(duì)于有血跡的樣本，可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中
七、服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目
| 分子生物學(xué)檢測(cè) | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 實(shí)時(shí)熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動(dòng)物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測(cè) | 蛋白雙向電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) | 原核蛋白表達(dá)純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達(dá)純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動(dòng)脈高血壓動(dòng)物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝純化 | 實(shí)驗(yàn)課題整體外包 | 粥樣動(dòng)脈硬化模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動(dòng)脈阻塞模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化 | 細(xì)胞整體實(shí)驗(yàn)外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)外包 | 過(guò)敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細(xì)胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細(xì)胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 信號(hào)通路磷酸化水平檢測(cè)芯片 | 心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細(xì)胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因編輯動(dòng)物 | |
| 趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
| HuProt TM 20K人類(lèi)蛋白組芯片 | 膜片鉗實(shí)驗(yàn) | |
| 細(xì)胞生物學(xué) | 高通量測(cè)序 | 代謝組學(xué) |
| 細(xì)胞原代培養(yǎng) | mRNA測(cè)序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測(cè) | LncRNA測(cè)序 | 液相色譜LC/MS |
| 細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 全基因組測(cè)序 | 核磁共震NMR |
| 細(xì)胞周期檢測(cè) | RNA-Seq測(cè)序 | |
| 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) | 外顯子測(cè)序 | 影像學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn) |
| Transwell細(xì)胞遷移/侵襲 | 16s擴(kuò)增子測(cè)序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測(cè)序 | 小動(dòng)物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測(cè) | 宏基因組測(cè)序 | 核磁共振 |
| 臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活性 | 單細(xì)胞測(cè)序 | PET-CT |
| 藥物篩選細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn) | circleRNA測(cè)序 | |
| 細(xì)胞粘附性檢測(cè) | 甲基化測(cè)序 | 基因編輯動(dòng)物 |
| 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn) | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn) | ||
| 病理學(xué)檢測(cè) | CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點(diǎn)突變細(xì)胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細(xì)胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細(xì)胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細(xì)胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測(cè) | 報(bào)告基因敲入細(xì)胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動(dòng)物敲除/敲入 |
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| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等） |
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| 行為學(xué)檢測(cè) | 藥物篩選服務(wù)項(xiàng)目 | 藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 水迷宮實(shí)驗(yàn) | 高通量自動(dòng)藥物篩選平臺(tái) | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺(tái) | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 重復(fù)性刻板行為檢測(cè) | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺(tái) | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 動(dòng)物跑臺(tái)檢測(cè) | 分子藥理研究平臺(tái) | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 強(qiáng)迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺(tái) | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理染色檢測(cè)、細(xì)胞敲除&敲入、模式與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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