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威斯騰生物經(jīng)過10多年的發(fā)展，獲得了上百種細(xì)胞株和四十余種原代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，并建立了龐大的細(xì)胞庫及原代培養(yǎng)資料庫。細(xì)胞平臺有資深實(shí)驗(yàn)員、規(guī)范的SOP操作文件，萬級凈化細(xì)胞房，這些條件為保質(zhì)保量完成每個(gè)客戶的實(shí)驗(yàn)提供了保障。 同時(shí)，威斯騰生物結(jié)合多年原代及傳代細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合平臺已有的技術(shù)優(yōu)勢，建立了完善的體外藥篩實(shí)驗(yàn)，并引進(jìn)RTCA(Real-time cellular Analysis，實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞真實(shí)狀況，為藥篩提供最真實(shí)精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

無菌操作注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風(fēng)30min，操作前需要換細(xì)胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實(shí)驗(yàn)服，戴上一次性口罩和帽子，操作時(shí)不能大聲說話，整個(gè)無菌操作都應(yīng)該在酒精燈的周圍進(jìn)行。

甲狀腺相關(guān)性眼病患的眼眶成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)

（1）無菌條件下，取出結(jié)締組織（人眼眶結(jié)締組織，重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院提供）后在含2×雙抗的預(yù)冷的PBS中洗3次。

（2）在PBS中除去脂肪組織，將結(jié)締組織剪成約2mm2小塊。

（3）用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞培養(yǎng)板潤洗一遍，待組織稍干后小心貼于細(xì)胞培養(yǎng)板上。

（4）將貼有組織的細(xì)胞培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中倒置30min，使組織盡快貼壁。

（5）30min后將完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，剛好沒過組織即可，培養(yǎng)數(shù)天。

（6）3d后半量換液，隔日觀察細(xì)胞爬出情況并添加培養(yǎng)基。

約8d后有細(xì)胞爬出。

大鼠心肌成纖維細(xì)胞原代分離培養(yǎng)

（1）將SD乳鼠在75%酒精中浸泡1-5min，然后固定在泡沫板上，先用碘酒消毒胸腹部，再用酒精消毒。取出無菌剪刀和鑷子，先用酒精棉球再次消毒，剪開胸，取心尖部位，快速置于含雙抗的預(yù)冷的PBS溶液潤洗3遍。

（2）剔除周圍結(jié)締組織，將心臟置于無菌平皿中，將心臟盡量剪碎，平皿內(nèi)加入適量0.125%的胰酶，在37度培養(yǎng)箱中，采用分次消化，每次消化5分鐘，一共消化8~10次。

（3）每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培養(yǎng)基，輕輕混勻，中和胰酶的消化，防止消化多度。用100目細(xì)胞過濾篩子過濾含細(xì)胞的混合液，最后將過濾后的細(xì)胞懸液1000R/MIN離心5分鐘。離心后收集沉淀，用PBS再次重復(fù)離心3次。用細(xì)胞培養(yǎng)基將細(xì)胞沉淀重懸。于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

（4）在培養(yǎng)90分鐘左右，將未貼壁的細(xì)胞懸液吸出。此時(shí)已經(jīng)貼壁的是心肌成纖維細(xì)胞，加入DMEM/F12培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

（5）24h換液，并每日觀察心肌成纖維細(xì)胞的生長。

威斯騰實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程

威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目

【本平臺合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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