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(a) MTT：

MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料?；罴毎阽晁崦摎涿负图毎豤的作用下四唑環(huán)開裂，生成藍色的甲月替結(jié)晶并沉積在細胞中，甲月替結(jié)晶的生成量僅僅與活細胞數(shù)目成正比（死細胞中的琥珀酸脫氫酶消失，不能還原MTT）。還原生成的甲月替結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸鈉（PH 4.7）或10%酸化十二甲基磺酸鈉（PH 4.7）的溶液中溶解。利用酶標儀測定490nm波長處的光密度測出OD值，即反映活細胞數(shù)目。也可利用DMSO（二甲基亞砜）來溶解。用DMSO之前要盡量去掉培養(yǎng)液，一遍DMSO溶解甲月替顆粒，進行比色測定。

(b) CCK-8檢測細胞增殖（活力）：

CCK-8（cell-counting kit-8）檢測試劑盒是應(yīng)用WST-8取代MTT被還原，WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學(xué)性狀更穩(wěn)定， 因此實驗結(jié)果相對更加穩(wěn)定。此外，WST-8相較MTT、XTT，線性范圍相對寬，靈敏度更高。

當細胞增殖得越多越快，則formazan產(chǎn)生量越多，顏色越深；反之，當內(nèi)外因造成的細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。應(yīng)用酶標儀測定吸光值并進行統(tǒng)計學(xué)計算便可以獲得細胞增殖（活性）相關(guān)數(shù)據(jù)。

(c) XTT：

化學(xué)名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色產(chǎn)物。當XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時，其所產(chǎn)生的水溶性的產(chǎn)物的吸光度與活細胞的數(shù)量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解還原產(chǎn)物結(jié)晶的步驟，XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產(chǎn)物（formazan）。代謝產(chǎn)物在OD450處有吸收峰。

1、使用方便，省去了洗滌細胞；2、檢測快速；3、靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT。 缺點：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。

應(yīng)用范圍

應(yīng)用案例

用cck8的方法檢測PDGF-D對細胞的毒性，本實驗采用2個藥物濃度，分別作用于細胞24小時、48小時、72小時，然后通過CCK8檢測增殖情況，從而反映其藥物對細胞的毒性。從表1以及柱狀圖中了解到藥物濃度越大作用細胞時間越長，其細胞的增殖率越大，即藥物對細胞的毒性越小。