科研服務(wù) 時(shí)間：2020-07-22 16:46:00 瀏覽：2879次
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一、透射電子顯微鏡結(jié)構(gòu)和成像原理
透射電子顯微鏡結(jié)構(gòu)包括兩大部分：主體部分為照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)和觀察照相室；輔助部分為真空系統(tǒng)和電氣系統(tǒng)。 |
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二、透射電鏡的應(yīng)用 |
透射電子顯微鏡在材料科學(xué)、生物學(xué)上應(yīng)用較多。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，樣品的密度、厚度等都會(huì)影響到最后的成像質(zhì)量，必須制備更薄的超薄切片，通常為50～100nm。所以用透射電子顯微鏡觀察時(shí)的樣品需要處理得很薄。
常用的方法：超薄切片法、冷凍超薄切片法、冷凍蝕刻法、冷凍斷裂法等。對(duì)于液體樣品，通常是掛預(yù)處理過(guò)的銅網(wǎng)上進(jìn)行觀察。
三、實(shí)驗(yàn)材料
PHILIPS TECNAI-10透射電子顯微鏡，2.5%戊二醛，細(xì)胞培養(yǎng)液（含10%血清），胰酶（使用時(shí)濃度為0.1%，含0.02%EDTA，制備時(shí)即取100mg胰酶和20mgEDTA溶于100mLPBS溶液，并在無(wú)菌操作臺(tái)上用一次性過(guò)濾器過(guò)濾）、PBS、6孔板、離心管等細(xì)胞培養(yǎng)常用物品。
四、透射電鏡樣本制備實(shí)驗(yàn)步驟
A．細(xì)胞處理步驟
用6孔板或培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60%-70%，吸出舊培養(yǎng)基，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加藥或外界刺激處理，最后用胰酶消化并收集細(xì)胞，1000r/min離心5min，棄上清，加PBS混勻，并轉(zhuǎn)移1.5mlEP管中，1000r/min離心10min，輕輕吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此時(shí)不要混勻吹打，使細(xì)胞成團(tuán)聚集，上下倒置細(xì)胞不散開(kāi)為最好，4℃保存。
樣品送檢，包埋，上機(jī)觀察拍照。
胰酶消化步驟：先吸除培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基，用PBS洗2次，加入胰酶消化液約0.5ml，晃動(dòng)使消化液鋪均勻，置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見(jiàn)細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入1-2ml完全培養(yǎng)基后，輕輕吹打，收集細(xì)胞至離心管，1000轉(zhuǎn)/min離心5min，棄上清，即得到細(xì)胞沉淀。
B．微生物處理步驟
收集微生物沉淀，加PBS混勻，并轉(zhuǎn)移1.5mlEP管中，1000r/min離心20min（時(shí)間較細(xì)胞處理的時(shí)間長(zhǎng)），輕輕吸去PBS，加1ml2.5%戊二醛，此時(shí)不要混勻吹打，使成團(tuán)聚集，上下倒置細(xì)胞不散開(kāi)為最好，4℃保存。
樣品送檢，包埋，上機(jī)觀察拍照。
C．組織塊處理步驟
取材。將組織切成1mm左右的方塊貯存于1.5mlEP管中。加1ml2.5%戊二醛， 4℃保存。
樣品送檢，包埋，上機(jī)觀察拍照。
結(jié)果展示：
威斯騰實(shí)驗(yàn)服務(wù)流程：
威斯騰生物服務(wù)項(xiàng)目
| 分子生物學(xué)檢測(cè) | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 實(shí)時(shí)熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動(dòng)物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測(cè) | 蛋白雙向電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè) | 原核蛋白表達(dá)純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達(dá)純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動(dòng)脈高血壓動(dòng)物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝純化 | 實(shí)驗(yàn)課題整體外包 | 粥樣動(dòng)脈硬化模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動(dòng)脈阻塞模型 |
| 過(guò)表達(dá)/干擾腺病毒包裝純化 | 細(xì)胞整體實(shí)驗(yàn)外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)外包 | 過(guò)敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細(xì)胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細(xì)胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 信號(hào)通路磷酸化水平檢測(cè)芯片 | 心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細(xì)胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 生長(zhǎng)因子芯片 | 血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細(xì)胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因編輯動(dòng)物 | |
| 趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動(dòng)物整體實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
| HuProt TM 20K人類(lèi)蛋白組芯片 | 膜片鉗實(shí)驗(yàn) | |
| 細(xì)胞生物學(xué) | 高通量測(cè)序 | 代謝組學(xué) |
| 細(xì)胞原代培養(yǎng) | mRNA測(cè)序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測(cè) | LncRNA測(cè)序 | 液相色譜LC/MS |
| 細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 全基因組測(cè)序 | 核磁共震NMR |
| 細(xì)胞周期檢測(cè) | RNA-Seq測(cè)序 | |
| 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) | 外顯子測(cè)序 | 影像學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn) |
| Transwell細(xì)胞遷移/侵襲 | 16s擴(kuò)增子測(cè)序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測(cè)序 | 小動(dòng)物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測(cè) | 宏基因組測(cè)序 | 核磁共振 |
| 臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活性 | 單細(xì)胞測(cè)序 | PET-CT |
| 藥物篩選細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn) | circleRNA測(cè)序 | |
| 細(xì)胞粘附性檢測(cè) | 甲基化測(cè)序 | 基因編輯動(dòng)物 |
| 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn) | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn) | ||
| 病理學(xué)檢測(cè) | CRISPR/Cas9細(xì)胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點(diǎn)突變細(xì)胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細(xì)胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細(xì)胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細(xì)胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測(cè) | 報(bào)告基因敲入細(xì)胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來(lái)源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細(xì)胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動(dòng)物敲除/敲入 |
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| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍(lán)等） |
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| 行為學(xué)檢測(cè) | 藥物篩選服務(wù)項(xiàng)目 | 藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 水迷宮實(shí)驗(yàn) | 高通量自動(dòng)藥物篩選平臺(tái) | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺(tái) | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 重復(fù)性刻板行為檢測(cè) | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺(tái) | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 動(dòng)物跑臺(tái)檢測(cè) | 分子藥理研究平臺(tái) | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 強(qiáng)迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺(tái) | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
| 常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià) |
【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理染色檢測(cè)、細(xì)胞敲除&敲入、模式與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、SPF動(dòng)物保種、免疫學(xué)檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、原代培養(yǎng)、細(xì)胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測(cè)序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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